毒理学试验中对参考物质的选择是替代测试方法的发展、优化和验证的关键步骤。EURL ECVAM JRC联合实验室根据现有更新的资料，修订了体外遗传毒性测试方法中遗传毒性和非遗传毒性的参考物质清单。自2008年开始，毒理学家们对参考物质清单达成共识并用于多种用途，包括现有试验程序的优化，全自动高通量测试的实施以及方法验证。此外，参考物质清单减少了一些体外方法的假阳性结果。

    新修订的清单包括69种不同结构和作用方式的化学物，分为体外试验阳性和阴性分类，有助于开发和接受新的和改良的体外遗传毒性方法，从而提高体外遗传毒性方法预测能力，改善操作程序。推荐清单主要适用于以下三类：
    第一类：该物质在体外哺乳动物细胞遗传毒性试验结果为阳性；该类物质是体内遗传毒性物质，通过DNA反应性或非DNA反应性（如引起非整倍体或引起拓朴异构酶抑制）。大多数是已知致突变的致癌物，而一部分物质是引起非整倍体化合物，其致癌机制尚不清楚。
    第二类：该类化学物在体外哺乳动物细胞遗传毒性试验结果为阴性，且现有体外哺乳动物细胞遗传毒性试验为阴性；该类物质通常体内遗传毒性试验阴性和非DNA反应性。通常是非致癌物或通过可接受的非致突变方式的啮齿类动物致癌物。
    第三类：体外哺乳动物遗传毒性试验阴性，但在高剂量或细胞毒性条件下，引起染色体畸变或小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变。该类物质通常体内遗传毒性结果阴性，Ames结果阴性，通常是非致癌物或通过可接受的非致突变方式的啮齿类动物致癌物。
 

表1  体内遗传毒性且体外哺乳动物细胞遗传毒性试验阳性参考物质

表2  非DNA反应性化学物（包括非遗传致癌物）且体外哺乳动物细胞遗传毒性试验阴性参考物质

表3  非DNA反应性化学物（包括非遗传致癌物）、代谢毒物和其他体外哺乳动物细胞遗传毒性试验阴性，

但通常在高剂量或高细胞毒性情况阳性参考物质